檢測試劑盒是一種常用的固相酶免疫測定方法。由于ELISA方法簡單,方便,靈敏,特異性強且不需要特殊設(shè)備(只需要酶標儀就可以),所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。
檢測試劑盒是通過酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)檢測特定物質(zhì)的試劑盒。檢測試劑盒中會有不同濃度的標準樣品,它們會與酶標簽條中的固相抗原或抗體、酶標記抗原或抗體以及酶底物發(fā)生反應(yīng)。可以形成標準曲線來確定試樣。
(1)檢測試劑盒要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA試劑盒測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
(3)血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。檢測試劑盒標本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標本的混勻亦應(yīng)注意,不要進行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
(5)標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。Elisa試驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學檢驗的各領(lǐng)域中。