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ELISA實驗操作流程

更新日期: 2021-06-22
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前期準備工作:

實驗前樣本和試劑盒室溫平行1小時,如果樣本是凍存樣本,應提前拿到2-8攝氏度進行解凍(不建議直接室溫解凍)

準備好實驗所需耗材,蒸餾水(去離子水)。

操作流程描敘:

  1. 將要進行實驗的版孔進行設定好,標準品5個點,每個點設定平行,需要用到10個孔,空白只需1個孔。剩下孔可以做為樣本孔
  2. 稀釋標準,準備好5EP管,然后在每個EP管中加入150微升標準稀釋液,編上編碼,分別為1,23,4,5,在1號管中加入150標準品,用槍頭反復吹打10次左右(注意控制幅度不要過大容易產生氣泡)如果有渦旋儀可以在渦旋儀上渦旋5秒左右,然后換槍頭,在1號管中取150微升加入到2號管,后面過程一次類推。最后稀釋完,前面4個管中每管液體在150微升,5號管為300微升。濃度是從大到小。
  3. 標準、樣本、空白加樣:標準是每個濃度點2個孔(做平行),每孔加入50微升,加樣過程中注意換槍頭,樣本孔中每孔加入50微升,加樣過程中注意換槍頭,空白孔加入50微升標準稀釋液或者樣本稀釋液。特別要說明的是,標準加樣和樣本加樣盡量控制在15分鐘內加完,如果時間拖的太長,會導致前面孔先反應后面孔才開始反應,這樣數值偏差過大。加完樣后蓋上封板膜,至37攝氏度孵育30分鐘.
  4. 洗版,在孵育過程中可以將洗滌液配好,20ml30倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗滌液(不要漫過版孔),(如果有震蕩儀的話,可以講板子放入震蕩儀上5秒左右,然后靜止三十秒,沒有請忽略次過程)將板子在桌子上晃動5秒左右,然后靜置30秒,甩干,拍板。說明:甩干過程盡量要快,1秒內就可以完成,不要慢慢傾斜倒掉液體,直接翻板甩掉液體即可。拍板過程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙,版孔朝下拍幾下,拍干區別主要看吸水紙和濾紙上沒有明顯的水漬為完成。
  5. 每孔加入50微升的酶標試劑,此處在空白孔中不需要加(空白孔為空),孵育30分鐘。
  6. 洗版同步驟4
  7. 顯色,先每孔中加入50微升的顯色A液,然后每孔中加入50微升顯色B液。避光37攝氏度顯色15分鐘
  8. 終止,每孔加入50微升的終止液,注意,加完終止液必須在15分鐘內讀數,超過時間讀數無效。在規定時間內讀數都是有效的。

至此,整個實驗結束

 

需要額外提醒的是:在做完整個實驗過儀器之前,儀器最好預熱半小時,這個計算好時間,也可以直接將儀器一直開著,直到整個實驗結束。

在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部,一般槍頭都懸空,可以將槍頭靠在孔邊緣,但槍頭尖懸空,如果槍頭上殘留液體看整體多少量,不要吹打下去。特別忌諱在版孔內壁流向版孔。整個加液過程不要產生氣泡。(洗滌液除外)

 

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